Dithiothreitol (DTT) একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত হ্রাসকারী এজেন্ট, এটি নতুন সবুজ সংযোজন হিসাবেও পরিচিত।এটি একটি ছোট আণবিক জৈব যৌগ যার দুটি মারকাপ্টান গ্রুপ (-SH) রয়েছে।এর হ্রাসকারী বৈশিষ্ট্য এবং স্থিতিশীলতার কারণে, ডিটিটি বায়োকেমিস্ট্রি এবং আণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষায় ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।
ডিটিটির প্রধান ভূমিকা হল প্রোটিন এবং অন্যান্য জৈব অণুতে ডিসালফাইড বন্ধন কমানো।ডিসালফাইড বন্ড প্রোটিন ভাঁজ এবং স্থায়িত্বের একটি গুরুত্বপূর্ণ অংশ, কিন্তু কিছু পরীক্ষামূলক অবস্থার অধীনে, যেমন হ্রাসযোগ্য SDS-PAGE বিশ্লেষণ, প্রোটিন পুনর্মিলন এবং ভাঁজ, এর স্থানিক গঠন উন্মোচন করার জন্য ডিসালফাইড বন্ধনকে দুটি থিওল গ্রুপে হ্রাস করা প্রয়োজন। প্রোটিনডিটিটি ডিসালফাইড বন্ডের সাথে প্রতিক্রিয়া করতে পারে যাতে তারা তাদের মারকাপটান গ্রুপে কমিয়ে দেয়, এইভাবে প্রোটিনের স্থানিক কাঠামো খুলে দেয় এবং এটি বিশ্লেষণ এবং ম্যানিপুলেট করা সহজ করে তোলে।
DTT এছাড়াও এনজাইম কার্যকলাপ এবং স্থিতিশীলতা রক্ষা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে.কিছু এনজাইম-অনুঘটক বিক্রিয়ায়, অক্সিডেন্ট দ্বারা এনজাইমের কার্যকলাপ হ্রাস পেতে পারে।ডিটিটি অক্সিডেন্টের সাথে প্রতিক্রিয়া করতে পারে যাতে তারা ক্ষতিকারক পদার্থে কমাতে পারে, যার ফলে এনজাইমের কার্যকলাপ এবং স্থিতিশীলতা রক্ষা করে।
β-mercaptoethanol (β-ME) এর মতো ঐতিহ্যগত হ্রাসকারী এজেন্টের তুলনায়, DTT একটি নিরাপদ এবং আরও স্থিতিশীল হ্রাসকারী এজেন্ট হিসাবে বিবেচিত হয়।এটি শুধুমাত্র জলীয় দ্রবণেই স্থিতিশীল নয়, উচ্চ তাপমাত্রা এবং অ্যাসিড-বেস অবস্থার অধীনে এর হ্রাসকারী বৈশিষ্ট্যগুলিও বজায় রাখে।
ডিটিটি ব্যবহার তুলনামূলকভাবে সহজ।সাধারণভাবে, ডিটিটি একটি উপযুক্ত বাফারে দ্রবীভূত হয় এবং তারপর পরীক্ষামূলক সিস্টেমে যোগ করা হয়।DTT এর সর্বোত্তম ঘনত্ব নির্দিষ্ট পরীক্ষা অনুযায়ী নির্ধারণ করা প্রয়োজন, এবং সাধারণত 0.1-1mM পরিসরে ব্যবহৃত হয়।নিম্ন ঘনত্ব কোষের বৃদ্ধির উপর প্রতিকূল প্রভাব কমাতে পারে এবং লক্ষ্য প্রোটিনের অতিরিক্ত এক্সপ্রেশনের কারণে সাইটোটক্সিসিটি কমাতে পারে।উচ্চতর ঘনত্ব কোষের অত্যধিক বিপাকীয় বোঝা সৃষ্টি করতে পারে, যা কোষের বৃদ্ধি এবং প্রকাশের দক্ষতাকে প্রভাবিত করে।
সর্বোত্তম ঘনত্ব নির্ধারণের উপায় হল বিভিন্ন ঘনত্বে IPTG আনয়ন পরীক্ষা পরিচালনা করে লক্ষ্য প্রোটিনের অভিব্যক্তি স্তরের মূল্যায়ন করা।আইপিটিজি ঘনত্বের একটি পরিসীমা (যেমন 0.1 মিমি, 0.5 মিমি, 1 মিমি, ইত্যাদি) ব্যবহার করে ছোট আকারের সংস্কৃতি পরীক্ষা করা যেতে পারে এবং লক্ষ্য প্রোটিনের অভিব্যক্তি স্তর সনাক্ত করে বিভিন্ন ঘনত্বে অভিব্যক্তি প্রভাব মূল্যায়ন করা যেতে পারে (যেমন পশ্চিমী দাগ বা ফ্লুরোসেন্স সনাক্তকরণ)।পরীক্ষামূলক ফলাফল অনুসারে, সর্বোত্তম অভিব্যক্তি প্রভাব সহ ঘনত্বকে সর্বোত্তম ঘনত্ব হিসাবে নির্বাচিত করা হয়েছিল।
এছাড়াও, আপনি অনুরূপ পরীক্ষামূলক অবস্থার অধীনে সাধারণভাবে ব্যবহৃত IPTG ঘনত্বের পরিসর বোঝার জন্য প্রাসঙ্গিক সাহিত্য বা অন্যান্য পরীক্ষাগারের অভিজ্ঞতাও উল্লেখ করতে পারেন এবং তারপর পরীক্ষামূলক প্রয়োজন অনুসারে অপ্টিমাইজ এবং সামঞ্জস্য করতে পারেন।
এটি লক্ষ করা গুরুত্বপূর্ণ যে সর্বোত্তম ঘনত্ব বিভিন্ন এক্সপ্রেশন সিস্টেম, লক্ষ্য প্রোটিন এবং পরীক্ষামূলক অবস্থার উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হতে পারে, তাই কেস-বাই-কেস ভিত্তিতে অপ্টিমাইজ করা ভাল।
সংক্ষেপে, ডিটিটি একটি সাধারণভাবে ব্যবহৃত হ্রাসকারী এজেন্ট যা প্রোটিন এবং অন্যান্য জৈব অণুতে ডিসালফাইড বন্ধন কমাতে এবং এনজাইমের কার্যকলাপ এবং স্থিতিশীলতা রক্ষা করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।এটি জৈব রসায়ন এবং আণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষায় ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়েছে।
পোস্টের সময়: সেপ্টেম্বর-28-2023